Kronik Miyeloid Lösemili Hastalarda Sitogenetik Analiz ve RT-PCR Tekniği ile Philadelphia Kromozomu ve BCR-ABL Füzyon Geninin Saptanması
No Thumbnail Available
Date
2021
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Amaç: Çalışmamızda 25 KML (Kronik Miyeloid Lösemi) hastasında Sitogenetik Analiz ve RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) Tekniği ile Ph (Philadelphia) kromozomu ve BCR-ABL füzyon geninin saptanması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntemler: Çalışmamıza dahil edilen hastalardan kemik iliği veya kan örnekleri alındı. RNA izolasyon kiti kullanılarak periferik kan, kemik iliği ve hücre hattından total RNA izolasyonu yapıldı. RNA saflığı spektrofotometre ile ölçülerek, çalışma için uygun saflıkta RNA’ lar seçildi. Random hekzamer primerleri ve reverse transkriptaz enzimi kullanılarak mRNA’ dan cDNA sentezi gerçekleştirildi. Hedef DNA oligonukleotid primerler kullanılarak iki basamaklı Nested PCR yöntemi ile çoğaltıldı. K562 hücre hattı pozitif kontrol olarak, distile su negatif kontrol olarak kullanıldı. PCR ürünleri ethidium bromide ile boyanmış agaroz jelde yürütülerek, jel görüntüleme sisteminde görüntülendi. Sitogenetik analiz için kemik iliği materyalinden 24 saatlik hücre kültürü yapıldı. Preparatlara G-Bantlama yapılarak mikroskobik incelemeleri gerçekleştirildi. Bulgular: Çalışmamıza 10 kadın, 15 erkek hasta dahil edildi. Hasta grubunun yaş ortalaması 53,24 olarak hesaplandı. PCR sonuçlarına göre; M-BCR/ABL 5 hastada negatif, 20 hastada pozitifti. Sitogenetik analizde her hasta preparatında 20 metafaz alanı incelendi. 5 hastada üreme gerçekleşmedi. 5 hastada 46,XY karyotip, 1 hastada 46,XX karyotip, 9 hastada 46,XY t (9;22) (q34, q11) karyotip, 5 hastada 46,XX (9;22) (q34;q11) karyotipi saptandı. Sitogenetik analizde üreme olmayan ve Ph kromozomu negatif olan hastalar moleküler analiz ile incelendi. 6 hastada M-BCR/ABL pozitif tespit edildi. Sonuçlarımıza göre M-BCR/ABL oranı 20/25 (% 80), Ph kromozom pozitifliği oranı % 80 olarak bulundu. Sonuç: KML hastalığında teşhis ve tedavide yanıtın izlenmesinde sitogenetik analiz ile daha hızlı ve daha duyarlı RT-PCR tekniği birlikte uygulanarak sonuçlar irdelenmiştir