Raw264.7 ve J774.G8 Hücrelerinden Elde Edilen Doksorubisin Yüklü Eksozom ve Nanoveziküllerin Metformin İle Kombinasyonlarının 4T1 ve 67NR Fare Meme Kanseri Hücreleri Üzerindeki Antikarsinojenik Etkilerinin Araştırılması
No Thumbnail Available
Date
2021
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Amaç: Bu çalışmada, metastatik (4T1) ve non-metastatik (67NR) fare meme kanseri hücreleri üzerinde; DOX ve MET?in tek başlarına veya kombine haldeki konsantrasyonlarının sitotoksik, apoptotik ve antikanser etkileri, hücresel ve moleküler açıdan araştırılmıştır. Ayrıca farklı karakteristikteki Raw264.7 ve J774.G8 fare monosit-makrofaj hücre hatlarından elde edilen olan EXO ve NV?ler DOX ile yüklenerek; 4T1 ve 67NR fare meme kanseri hücreleri üzerindeki tek başlarına ve MET ile birlikte bir ilaç taşıma platformu olarak etkinliklerinin belirlenmesi amaçlanmaktadır. Yöntem: Fare monosit-makrofaj hücrelerinden; ultrasantrifüj yöntemi kullanılarak EXO?lar elde edildi ve seri ekstrüzyon yöntemi ile de NV?ler üretildi. EXO ve NV?lerin ELISA ve flowsitometri yöntemleri ile karakterizasyonları yapıldı. İzopiknik santrifügasyon yöntemi kullanılarak pürifiye edilen EXO ve NV?ler DOX ile yüklendi. EXO, EXODOX, NV ve NVDOX?lerin tek başlarına ve koefektif (MET ile birlikte) konsantrasyonlarının metastatik ve non-metastatik fare meme kanseri hücre hatları üzerindeki sitotoksik, apoptotik ve antikarsinojen etkileri; MTT, immünositokimya, TUNEL ve qPCR yöntemleri kullanılarak tespit ve analiz edildi. Bulgular: Aynı sayıdaki monosit-makrofaj hücresinden EXO miktarı ile kıyaslandığında yaklaşık 5 kat daha fazla miktarda NV elde edildi. EXO ve NV?lerin aynı yüzey belirteçlerini ifade ettikleri ve taşıdıkları DOX miktarının benzer olduğu gözlendi. DOX yüklü EXO ve NV?lerin serbest DOX?a kıyasla 4,5 kat daha az DOX miktarı ile aynı sitotoksik etki gösterdiği tespit edildi. DOX ve MET arasında sinerjistik etkinin olduğu ve MET?in DOX?in sitotoksik aktivitesini arttırdığı saptandı. Benzer sinerjistik etki DOX yüklü EXO ve NV?ler ile birlikte MET uygulanan gruplarda da gözlendi. Immunositokimya, qPCR ve TUNEL analizleri sonucunda en fazla sitotoksik ve apoptotik etkinin DOX yüklü EXO ve NV?ler ile birlikte MET uygulanan gruplarda olduğu tespit edildi. DOX uygulaması sonrası artmış c-MYC, HIF1? ve VCAM1 ifadelerinin MET tarafından inhibe edildiği saptandı. Sonuçlar: EXO ve NV?lerin, DOX?i 4T1 ve 67NR fare meme kanseri hücrelerine daha etkili bir şekilde taşıdıkları ve meme kanserlerinde bir DOX taşıma platformu olarak kullanılabileceği gösterildi. Bir ilaç taşıma platformu olarak; EXO mimetiği NV?lerin EXO?lar kadar etkili olduğu ve aynı sayıdaki hücreden çok daha fazla miktarda ve daha kısa sürede NV elde edilebildiği saptandı. MET?in DOX?in sitotoksik aktivitesini arttırdığı belirlendi. Invivo tümör modeli çalışmaları ile bu sonuçların araştırılması gerekmektedir.