Glia Hücrelerinin Antimona Dirençli Leishmania tropica ile Enfekte Edilmesi: Yeni Bir ex-vivo Modeli
No Thumbnail Available
Date
2018
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Leyşmanyazis; kutanöz, mukokutanöz, viseral ve viserotropik formlar gibi farklı klinik özellikleresahip vektör kaynaklı zoonotik bir hastalıktır. Leyşmanyazis ilaç tedavisinde kullanılan protokoller toksiketkilere sahiptir ve uygulamalar sırasında birçok kısıtlılık oluşmaktadır. Tedavi ile ilgili kısıtlılıklardanen önemlisi uygulanan protokollere karşı gelişen dirençtir. Özellikle dirençli hastalar için yeni tedaviseçeneklerinin geliştirilmesine ihtiyaç duyulmaktadır. Antimona direnci olan hastalarda yeni ilaçseçeneklerinin değerlendirilmesi için in-vitro ve in-vivo çalışmalara ek olarak, primer hücre kültürlerinikullanan ex-vivo modellerin iyi bir kaynak olabileceği düşünülmektedir. Bu çalışmada, tedaviye yanıtvermeyen kutanöz leyşmanyazisli hastalarda tedavi seçeneklerini değerlendirmek için yeni bir ex-vivokültür modelinin tanımlanması amaçlanmıştır. Çalışmamızda oluşturulan deneysel ex-vivo enfeksiyon modelinde, önceden kutanöz leyşmanyazis tanısı almış bir olgudan elde edilen Leishmania tropicapromastigot formu kullanılmıştır. Ex-vivo modeli için kullanılacak primer astroglial hücre kültürü,steril koşullar altında, 2-3 günlük yeni doğan Sprague Dawley sıçan beyinlerinden McCarthy yöntemimodifiye edilerek hazırlanmıştır. Yeterli yoğunluğa ulaşan astroglia hücreleri antimona dirençli L.tropicapromastigotları ile enfekte edilmiştir. Yirmi dört saatlik inkübasyondan sonra, hücrelerin üzerinde bulunanüst sıvı toplanmış, hücre kültür plağı oda sıcaklığında kurutulduktan sonra metil alkol ile fikse edilmiş veGiemsa boyası ile boyanarak L.tropica amastigotları tanımlanmıştır. L.tropica promastigotları ile enfekteedilen primer hücre kültürlerinde glia hücreleri içerisinde amastigotlar yoğun bir şekilde gözlenmiştir.Enfekte edilen plaklardan elde edilen sıvı besiyerinin santrifüjü sonrası dip çökeltiden hazırlananyaymaların Giemsa boyası ile hazırlanan preparatlarında parazitin promastigot formu gözlenmemiştir.Bu çalışmada beş değerlikli antimon tedavisine yanıt alınamayan kutanöz leyşmanyazisli bir hastadanelde edilen promastigotların sıçan glia hücrelerini enfekte ederek amastigot formuna dönüştüğügösterilmiştir. Oluşturulan bu amastigot glia hücre modeli bildiğimiz kadarıyla L.tropica ile oluşturulanliteratürdeki ilk modeldir. Glia hücreleri içerisinde L.tropica amastigot şekillerinin görülmesi Leishmaniatürlerinin santral sinir sistemini enfekte edebileceğinin göstergesi olarak düşünülmüştür. Tedaviye yanıtalınamayan leyşmanyazis olgularında, santral sinir sistemi Leishmania amastigotlarının immün sistemdenkaçması için uygun bir alan olarak gözükmektedir. Bu çalışma, glia hücrelerinin L.tropica amastigotları ileenfeksiyonunu gösteren ilk çalışma olması nedeniyle önem arz etmektedir.